蛋白質(PRO)檢測

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蛋白質檢測是生物化學、分子生物學和臨床醫學中常用的實驗技術，用于定量或定性分析樣品中的蛋白質含量或種類。以下是蛋白質檢測的常用方法、步驟和應用場景的概述：

一、常用檢測方法

1. 比色法（Colorimetric Assays）

   • Bradford法：基于考馬斯亮藍染料與蛋白質結合后顏色變化（藍色），最大吸收峰在595 nm。靈敏度高，但易受去污劑（如SDS）干擾。
   • BCA法（Bicinchoninic Acid）：銅離子在堿性條件下被蛋白質還原，與BCA試劑反應生成紫色復合物，檢測562 nm吸光度。適合含去污劑的樣品。
   • Lowry法：結合雙縮脲反應和Folin-酚試劑，靈敏度高但步驟繁瑣，易受多種物質干擾（如Tris緩沖液）。

2. 紫外分光光度法

   • 利用蛋白質中酪氨酸、色氨酸在280 nm處的吸光度（A280）直接定量。快速但受核酸或其他雜質干擾，需高純度樣品。

3. ELISA（酶聯免疫吸附試驗）

   • 通過抗原-抗體特異性結合，結合酶標記的二抗催化底物顯色，用于定量特定蛋白質（如細胞因子、疾病標志物）。

4. Western Blot（蛋白質印跡）

   • 電泳分離蛋白質后轉膜，用特異性抗體雜交檢測目標蛋白，兼具定性和半定量功能。

5. 質譜分析

   • 高精度鑒定蛋白質種類、修飾和結構，常用于蛋白質組學研究。

6. 熒光/化學發光法

   • 使用熒光染料（如SYPRO Ruby）或化學發光底物標記蛋白質，靈敏度極高。

二、檢測步驟（以Bradford法為例）

1. 樣品制備：裂解細胞或組織，離心去除碎片，收集上清液。
2. 標準曲線制作：用已知濃度的標準蛋白（如BSA）梯度稀釋，與試劑反應后測吸光度。
3. 樣品檢測：將待測樣品與Bradford試劑混合，室溫靜置2-5分鐘。
4. 吸光度測定：在595 nm波長下讀取吸光度值，通過標準曲線計算樣品蛋白濃度。
5. 數據分析：排除異常值，計算平均值和標準差。

三、應用場景

1. 生物醫學研究

   • 細胞或組織中總蛋白定量（如細胞裂解液濃度標準化）。
   • 目標蛋白表達水平分析（如Western Blot前確保上樣量一致）。

2. 臨床診斷

   • 血液/尿液中的蛋白質檢測（如尿蛋白檢測用于腎臟疾病篩查）。
   • 腫瘤標志物（如PSA、CEA）的定量分析。

3. 食品工業

   • 食品中蛋白質含量測定（如牛奶、肉類制品的質量控制）。

4. 藥物開發

   • 藥物對蛋白質表達的影響評估（如靶點蛋白的調控分析）。

四、注意事項

1. 避免干擾物質

   • 去污劑（SDS、Triton）、還原劑（DTT）或高鹽緩沖液可能影響檢測結果，需選擇兼容的方法（如BCA法對SDS耐受性較好）。

2. 標準化操作

   • 同一實驗中需使用同一種標準蛋白（如BSA或目標蛋白本身）。
   • 確保樣品與標準蛋白的氨基酸組成相似，以減少誤差。

3. 樣品保存

   • 長期保存需分裝后置于-80°C，避免反復凍融導致蛋白質降解。

4. 質量控制

   • 每次實驗設置空白對照（不含蛋白的緩沖液+試劑）。
   • 重復測定至少3次以提高準確性。

五、常見問題

• 結果偏高：可能因核酸污染（A280法）或存在還原性物質（Lowry法）。
• 結果偏低：蛋白質未完全溶解或發生沉淀，需優化裂解條件。
• 標準曲線線性差：檢查標準品是否變質或稀釋是否準確。

根據具體需求（如靈敏度、樣本類型、設備條件）選擇合適的檢測方法，并結合預實驗優化條件，可顯著提高檢測準確性。

實驗儀器

測試流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準。

2.文章中的圖片或者標準以及具體的試驗方案僅供參考，因為每個樣品和項目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準。

3.關于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（蛋白質(PRO)檢測）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。