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泛素化檢測技術解析：樣品、方法與儀器

檢測樣品

泛素化檢測的樣品類型多樣，主要包括細胞裂解液、組織提取物以及體外表達的重組蛋白。對于細胞樣品，需通過裂解液（如RIPA緩沖液）破碎細胞并提取總蛋白；組織樣品則需先進行勻漿處理，去除雜質后獲取可溶性蛋白；重組蛋白樣品通常來源于原核或真核表達系統，需驗證純度后用于后續實驗。

檢測項目

泛素化檢測的核心目標是鑒定目標蛋白是否發生泛素化修飾，并分析修飾水平、修飾位點及修飾類型（如單泛素化、多聚泛素化）。此外，還可評估E3泛素連接酶或去泛素化酶（DUB）的活性，明確其在蛋白質降解通路中的調控作用。

檢測方法

Western blot技術是泛素化檢測的經典方法，通過抗泛素抗體或標簽抗體（如HA、Flag）識別目標蛋白的泛素化形式。為提高特異性，常結合免疫共沉淀（Co-IP）富集目標蛋白，再通過SDS-PAGE分離后進行免疫印跡分析。 質譜分析用于精確鑒定泛素化位點及修飾類型，該方法需先通過親和層析或抗體富集泛素化蛋白，酶解后利用高分辨率質譜解析肽段序列。 體外泛素化反應常用于研究E3連接酶活性，將純化的E1、E2、E3酶與底物蛋白在ATP存在下孵育，通過檢測底物泛素化水平評估酶活性。

檢測儀器

1. 蛋白電泳系統：包括垂直電泳槽和電源，用于SDS-PAGE分離蛋白樣品。
2. 化學發光成像儀：Western blot結果需通過化學發光底物顯影，并由成像系統定量分析條帶灰度值。
3. 高效液相色譜-質譜聯用儀（HPLC-MS/MS）：用于泛素化肽段的分離與鑒定，需配備納升液相系統和高靈敏度質譜儀（如Q-Exactive系列）。
4. 酶標儀：部分實驗通過熒光或吸光度法檢測體外反應中的ATP消耗或底物修飾水平。

結語

泛素化檢測技術是研究蛋白質功能調控的重要手段，其應用涵蓋疾病機制研究、藥物靶點篩選等領域。選擇適宜的樣品處理方法、檢測方案及儀器平臺，可顯著提升實驗結果的準確性與可重復性。

實驗儀器

測試流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準。

2.文章中的圖片或者標準以及具體的試驗方案僅供參考，因為每個樣品和項目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準。

3.關于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（泛素化檢測）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。