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細胞中支原體檢測的關鍵流程與技術要點

支原體污染是細胞培養過程中常見的質量問題之一，可能影響實驗結果的可靠性甚至導致細胞功能異常。為確保細胞樣本的純凈性，需通過標準化流程進行支原體檢測。以下從檢測樣品、檢測項目、方法及儀器等方面展開說明。

檢測樣品

支原體檢測的樣本通常包括以下幾類：

1. 哺乳動物細胞系：如HEK293、CHO、HeLa等常用細胞系。
2. 原代細胞：從動物或人體直接分離培養的細胞。
3. 干細胞及類器官：如誘導多能干細胞（iPSCs）或3D培養的類器官模型。
4. 病毒疫苗生產用細胞基質：如Vero細胞、MDCK細胞等。

檢測項目

支原體檢測的核心目標包括：

1. 支原體污染篩查：確認樣本中是否存在支原體污染。
2. 支原體菌種鑒定：明確污染源的具體菌種（如肺炎支原體、口腔支原體等）。
3. 定量分析：評估污染程度（如通過核酸拷貝數定量）。

檢測方法

目前主流的支原體檢測技術包括以下四種：

1. 培養法 通過將樣本接種于支原體專用培養基（如Hayflick培養基），在厭氧條件下培養28天，觀察是否出現典型的“煎蛋樣”菌落。該方法特異性高，但耗時較長。

2. PCR法 利用支原體特異性引物（如靶向16S rRNA基因序列），通過聚合酶鏈式反應（PCR）擴增DNA片段，結合電泳或熒光探針判斷結果。該方法靈敏度高，可在4-6小時內完成檢測。

3. 熒光染色法 使用Hoechst 33258等熒光染料對細胞DNA進行染色，通過熒光顯微鏡觀察細胞周圍是否出現支原體特有的微小顆粒。此方法操作簡便，但需排除其他微生物干擾。

4. 酶聯免疫吸附法（ELISA） 基于支原體膜蛋白與特異性抗體的結合反應，通過顯色反應判斷污染情況，適用于高通量篩查。

檢測儀器

不同檢測方法需匹配相應的儀器設備：

• PCR儀：用于核酸擴增（如Bio-Rad T100 Thermal Cycler）。
• 熒光顯微鏡：觀察染色樣本（如Olympus IX73）。
• 酶標儀：讀取ELISA板吸光度值（如Thermo Fisher Multiskan GO）。
• 生化培養箱：提供恒溫恒濕環境以支持培養法（如Memmert INCOmed）。
• 高速離心機：用于樣本預處理（如Eppendorf 5430R）。

結語

支原體檢測是細胞質量控制的重要環節。通過選擇適配的檢測方法并規范操作流程，可有效避免因污染導致的實驗偏差，為細胞相關研究及生物制品生產提供可靠保障。建議實驗室結合樣本類型、檢測周期及靈敏度需求，綜合制定檢測方案。

實驗儀器

測試流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準。

2.文章中的圖片或者標準以及具體的試驗方案僅供參考，因為每個樣品和項目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準。

3.關于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（細胞中支原體檢測）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。