細胞熱轉變檢測

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細胞熱轉變檢測技術及其應用

細胞熱轉變檢測（Cellular Thermal Shift Assay, CETSA）是一種基于蛋白質熱穩定性變化的功能性分析技術，廣泛應用于藥物開發、靶點驗證及疾病機制研究等領域。該技術通過監測溫度變化對細胞內蛋白質構象的影響，揭示藥物與靶蛋白的結合情況。以下為檢測流程的核心內容。

一、檢測樣品

細胞熱轉變檢測的樣品類型主要包括：

1. 體外培養細胞：如腫瘤細胞系（Hela、A549）、干細胞、原代細胞等。
2. 組織樣本：通過機械破碎或酶解法提取的動物或人體組織細胞。
3. 重組蛋白溶液：純化后的特定蛋白樣品，用于對照實驗。

二、檢測項目

檢測涵蓋以下關鍵指標：

1. 細胞熱穩定性分析：評估目標蛋白在不同溫度下的構象變化。
2. 藥物-靶蛋白結合驗證：檢測藥物處理后蛋白熱穩定性的改變，確認結合活性。
3. 變性溫度（Tm值）測定：確定目標蛋白發生不可逆變性的臨界溫度。
4. 熱誘導蛋白聚集或降解分析：研究溫度對蛋白穩定性的長期影響。

三、檢測方法

1. 樣品預處理：細胞或組織經裂解緩沖液處理后，分裝至多孔板中，設置溫度梯度（如37°C至70°C）。
2. 熱應激處理：將樣品置于精確控溫設備中孵育，誘導蛋白質變性。
3. 離心分離：去除熱變性沉淀的蛋白，保留可溶性蛋白。
4. 蛋白定量：采用Western Blot、ELISA或質譜技術分析目標蛋白含量。
5. 數據分析：通過軟件計算Tm值，繪制熱穩定性曲線，評估藥物結合效應。

四、檢測儀器

1. 差示掃描量熱儀（DSC）：用于高精度測定蛋白變性溫度。
2. 實時熒光定量PCR儀：部分實驗通過熒光染料（如SYPRO Orange）監測蛋白變性過程。
3. 多功能酶標儀：配合化學發光或熒光檢測試劑完成高通量蛋白定量。
4. 離心機與恒溫孵育箱：實現樣品快速分離及精準溫控。

五、技術優勢

細胞熱轉變檢測具有靈敏度高、適用范圍廣的特點，可同時分析活細胞及無細胞體系。其數據可直接反映藥物與靶蛋白的結合能力，為藥物篩選提供可靠依據。目前，該技術已成功應用于激酶抑制劑、抗癌藥物及免疫調節劑的研發中。

通過細胞熱轉變檢測，研究人員能夠從分子層面解析藥物作用機制，加速精準醫療與個性化治療方案的開發。隨著自動化設備的普及，該技術將進一步推動生命科學領域的創新突破。

實驗儀器

測試流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準。

2.文章中的圖片或者標準以及具體的試驗方案僅供參考，因為每個樣品和項目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準。

3.關于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（細胞熱轉變檢測）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。