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穩轉細胞檢測技術流程與應用

檢測樣品

穩轉細胞檢測的樣品主要為經過基因工程改造的穩定轉染細胞系，例如HEK293、CHO、HeLa等常見哺乳動物細胞系。樣品需滿足以下條件：

1. 細胞狀態良好，活率≥90%；
2. 轉染基因穩定整合至基因組并通過篩選（如抗生素篩選）；
3. 傳代次數控制在20代以內，避免基因沉默或表達不穩定。

檢測項目

穩轉細胞檢測的核心項目包括：

• 基因表達水平：檢測外源基因的轉錄活性；
• 蛋白表達水平：定量或定性分析目標蛋白的表達量與功能；
• 細胞活力與增殖能力：評估穩轉對細胞生長的影響；
• 抗生素抗性驗證：確認篩選標記基因的有效性；
• 長期穩定性：分析目標基因在連續傳代中的表達一致性。

檢測方法

1. 基因表達水平檢測

采用**實時熒光定量PCR（qPCR）**技術，通過特異性引物擴增目標基因，以內參基因（如GAPDH）為對照，計算相對表達量。

2. 蛋白表達水平檢測

• Western Blot：通過SDS-PAGE分離蛋白，轉膜后使用特異性抗體檢測目標蛋白；
• 流式細胞術：針對表面蛋白或熒光標記蛋白，定量分析表達陽性細胞比例。

3. 細胞活力與增殖檢測

• CCK-8法：通過檢測細胞代謝活性間接反映增殖能力；
• 細胞計數與形態觀察：結合臺盼藍染色評估活細胞比例。

4. 長期穩定性檢測

連續傳代培養后，定期取樣檢測目標基因或蛋白的表達水平，繪制穩定性趨勢圖。

檢測儀器

1. 實時熒光定量PCR儀（如Bio-Rad CFX96）：用于基因表達定量分析；
2. 酶標儀（如Thermo Scientific Multiskan GO）：讀取CCK-8、熒光素酶報告基因等吸光度或熒光信號；
3. 流式細胞儀（如BD FACSCelesta）：高通量分析蛋白表達及細胞分選；
4. 蛋白電泳系統（如Bio-Rad Mini-PROTEAN）：完成Western Blot的凝膠制備與電泳；
5. 細胞培養箱（如Thermo Scientific Heracell 150i）：提供恒溫恒濕的細胞培養環境。

總結

穩轉細胞檢測是基因功能研究、藥物篩選及生物制品開發的關鍵技術。通過標準化的檢測流程與先進儀器，可確保實驗數據的準確性和可重復性，為后續研究提供可靠依據。

作者：生物檢測中心 | 發布時間：2023年10月

實驗儀器

測試流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準。

2.文章中的圖片或者標準以及具體的試驗方案僅供參考，因為每個樣品和項目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準。

3.關于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（穩轉細胞檢測）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。