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細胞培養葡萄糖檢測

原創發布者:北檢院    發布時間:2025-04-08     點擊數:

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細胞培養液中葡萄糖濃度檢測方法與流程解析

在細胞培養過程中,葡萄糖作為細胞代謝的主要能量來源,其濃度變化直接影響細胞生長狀態和產物合成效率。因此,準確檢測培養液中的葡萄糖濃度是優化培養工藝和評估細胞代謝活性的關鍵環節。以下從檢測樣品、項目、方法及儀器等方面進行詳細介紹。

一、檢測樣品

檢測對象為細胞培養液,包括:

  1. 哺乳動物細胞(如CHO、HEK293)培養液;
  2. 微生物(如大腸桿菌、酵母)發酵液;
  3. 貼壁或懸浮培養體系的廢棄培養液或實時取樣液。

樣品需在無菌條件下采集,離心去除細胞碎片后,取上清液進行檢測。

二、檢測項目

  1. 葡萄糖濃度:定量分析培養液中葡萄糖的實時含量;
  2. 葡萄糖代謝速率:通過多時間點檢測計算單位時間內葡萄糖消耗量;
  3. 殘留葡萄糖量:培養結束后剩余葡萄糖濃度,用于評估代謝終點。

三、檢測方法

1. 酶標法(GOD-POD法)

原理:葡萄糖氧化酶(GOD)催化葡萄糖生成過氧化氫(H?O?),過氧化物酶(POD)進一步催化H?O?與顯色劑(如鄰聯茴香胺)反應,生成有色產物。通過吸光度值計算葡萄糖濃度。 步驟

  • 取50 μL樣品與200 μL GOD-POD試劑混合;
  • 37℃孵育15分鐘;
  • 使用酶標儀測定505 nm波長下的吸光度,通過標準曲線換算濃度。

2. 比色法(DNS法)

原理:3,5-二硝基水楊酸(DNS)在堿性條件下與葡萄糖還原產物(如葡萄糖酸)反應,生成棕紅色絡合物,通過比色定量。 步驟

  • 樣品與DNS試劑混合后沸水浴5分鐘;
  • 冷卻后測定540 nm吸光度,對照標準曲線計算濃度。

3. 生物傳感器法

原理:利用葡萄糖氧化酶固定化電極,實時檢測葡萄糖氧化產生的電流信號,直接輸出濃度值。

四、檢測儀器

  1. 酶標儀(如BioTek Synergy H1):適用于高通量酶標法檢測,支持多波長分析;
  2. 分光光度計(如Thermo Scientific NanoDrop):用于比色法單樣品快速檢測;
  3. 生物傳感器分析儀(如YSI 2900):實現實時在線監測,適用于發酵罐集成系統;
  4. 高效液相色譜(HPLC):搭配示差折光檢測器,可同時檢測葡萄糖及其他碳源成分。

五、應用與意義

通過精準檢測葡萄糖濃度,研究人員可動態調整補料策略,避免營養缺乏或代謝副產物(如乳酸)積累,從而提升細胞密度和產物得率。此外,該數據還可用于構建代謝模型,為工藝放大提供理論依據。

關鍵詞:細胞培養、葡萄糖檢測、GOD-POD法、酶標儀、代謝調控

實驗儀器

實驗室儀器 實驗室儀器 實驗室儀器 實驗室儀器

測試流程

細胞培養葡萄糖檢測流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準。

2.文章中的圖片或者標準以及具體的試驗方案僅供參考,因為每個樣品和項目都有所不同,所以最終以工程師告知的為準。

3.關于(樣品量)的需求,最好是先咨詢我們的工程師確定,避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右,部分樣品有所差異

5.如果對于(細胞培養葡萄糖檢測)還有什么疑問,可以咨詢我們的工程師為您一一解答。

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  • 定制方案 提供非標定制試驗方案
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