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注意：因業務調整，暫不接受個人委托測試望見諒。

組織蛋白酶活性檢測方法與實驗流程

檢測樣品

本實驗檢測的樣品主要包括以下類型：

1. 動物組織樣本：如大鼠肝臟、腎臟或腫瘤組織等，需經勻漿處理后獲取酶提取液。
2. 細胞樣本：如人源腫瘤細胞系（例如HepG2、A549）或原代細胞，需裂解后離心取上清液。
3. 臨床樣本：如患者血清、組織活檢液等，需按生物安全規范預處理。

所有樣品需在-80℃超低溫冰箱中保存，檢測前解凍并離心去除雜質。

檢測項目

本實驗的核心檢測項目為組織蛋白酶（Cathepsin）活性，具體包括：

• 組織蛋白酶B（Cathepsin B）：參與腫瘤轉移及炎癥反應。
• 組織蛋白酶L（Cathepsin L）：與細胞凋亡和病毒感染相關。
• 組織蛋白酶S（Cathepsin S）：調控抗原呈遞及免疫應答。
• 組織蛋白酶K（Cathepsin K）：主要參與骨吸收過程。

檢測方法

實驗采用熒光底物法檢測酶活性，具體步驟如下：

1. 樣品處理：將待測樣品與反應緩沖液（pH 5.5，含DTT和EDTA）混合，冰上孵育10分鐘。
2. 反應體系：加入熒光標記底物（如Z-FR-AMC），37℃避光反應30分鐘。
3. 終止反應：加入終止液（3%醋酸溶液）終止酶促反應。
4. 檢測熒光信號：使用熒光分光光度計測定釋放的熒光產物（激發波長380 nm，發射波長460 nm）。

酶活性通過標準曲線法計算，以單位時間內底物降解量表示（U/mg蛋白）。

檢測儀器

實驗所需主要儀器設備如下：

• 熒光分光光度計：用于定量檢測熒光強度（型號如BioTek Synergy H1）。
• 酶標儀：適用于高通量樣本檢測（推薦Tecan Infinite M200）。
• 低溫離心機：用于樣品預處理（如Eppendorf 5430R）。
• 恒溫水浴鍋或PCR儀：控制反應溫度（精度±0.5℃）。
• 微量移液器：精確移取樣品與試劑（量程0.1-1000 μL）。

結果與討論

通過本方法可快速測定不同樣品中組織蛋白酶的活性差異。例如，腫瘤組織中Cathepsin B活性顯著高于正常組織（P<0.01），提示其可能作為腫瘤標志物。實驗需嚴格控制反應時間與溫度，避免底物自發降解導致的誤差。

結論

熒光底物法具有靈敏度高、重復性好的特點，適用于多種生物樣本的組織蛋白酶活性分析。該方法可為疾病機制研究、藥物篩選及臨床診斷提供可靠數據支持。實驗成功的關鍵在于規范操作流程及嚴格質量控制。

實驗儀器

測試流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準。

2.文章中的圖片或者標準以及具體的試驗方案僅供參考，因為每個樣品和項目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準。

3.關于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（組織蛋白酶活性檢測）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。