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注意：因業務調整，暫不接受個人委托測試望見諒。

流式細胞術檢測細胞凋亡實驗分析

檢測樣品

本實驗的檢測樣品為體外培養的哺乳動物細胞系，包括人宮頸癌細胞（HeLa）、人肺癌細胞（A549）及小鼠成纖維細胞（NIH/3T3）。所有細胞均接種于含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培養基中，在37℃、5% CO?培養箱中擴增至對數生長期。實驗組細胞經不同濃度化療藥物（如順鉑、紫杉醇）或紫外線輻射誘導凋亡，對照組為未經處理的正常細胞。收集細胞前，用胰酶消化后離心（1000 rpm，5分鐘），PBS洗滌兩次，最終重懸于預冷緩沖液中，冰上保存待測。

檢測項目

1. 細胞凋亡比例分析：通過Annexin V-FITC/PI雙染法區分早期凋亡（Annexin V?/PI?）與晚期凋亡或壞死（Annexin V?/PI?）細胞。
2. 線粒體膜電位變化：采用JC-1熒光探針檢測線粒體膜電位下降，評估凋亡早期線粒體功能狀態。
3. Caspase-3活性檢測：使用FITC標記的Caspase-3抑制劑（FITC-DEVD-FMK）標記激活的Caspase-3，定量凋亡相關酶活性。
4. DNA斷裂分析：通過TUNEL法（末端脫氧核苷酸轉移酶介導的dUTP缺口末端標記）檢測凋亡細胞中DNA斷裂情況。

檢測方法

1. 樣品制備：
   • 收集細胞后，用預冷PBS洗滌兩次，調整細胞密度至1×10?/mL。
   • Annexin V-FITC/PI染色：取100 μL細胞懸液，加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI染液（避光孵育15分鐘）。
   • JC-1染色：按說明書比例加入JC-1工作液，37℃孵育20分鐘后離心去除多余染料。
2. 流式細胞儀檢測：
   • 上機前用300目濾網過濾細胞懸液，避免堵塞流式細胞儀噴嘴。
   • 設置FL1（FITC）和FL2（PE）通道檢測Annexin V/PI信號，FL1/FL3通道分析JC-1單體（綠色）與聚合物（紅色）熒光強度。
   • 每樣本采集10,000個細胞信號，通過閾值排除碎片干擾。
3. 數據分析：
   • 使用FlowJo軟件劃分活細胞、早期凋亡及晚期凋亡細胞群，計算各象限細胞百分比。
   • JC-1實驗以紅綠熒光比值降低判定線粒體膜電位喪失。

檢測儀器

1. 流式細胞儀：
   • 儀器型號：BD FACSCanto™ II（美國BD公司）
   • 配置參數：3激光（488 nm藍激光、633 nm紅激光、405 nm紫激光），8通道熒光檢測系統。
   • 軟件系統：BD FACSDiva™ 8.0.1，支持多色熒光補償調節與實時數據采集。
2. 輔助設備：
   • 離心機：Eppendorf 5810R（德國Eppendorf公司），轉速范圍100-15,000 rpm。
   • 細胞培養箱：Thermo Scientific Heracell 150i，溫度精度±0.2℃，CO?濃度控制誤差≤1%。
   • 熒光顯微鏡：Nikon Eclipse Ti2，用于預實驗染色效果觀察。

結論 流式細胞術可高效、多參數地定量細胞凋亡動態過程，結合特異性熒光探針與高靈敏度檢測系統，為藥物篩選、毒性評估及凋亡機制研究提供可靠數據支持。

實驗儀器

測試流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準。

2.文章中的圖片或者標準以及具體的試驗方案僅供參考，因為每個樣品和項目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準。

3.關于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（流式細胞檢測細胞凋亡檢測）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。