流式檢測細胞殺傷檢測

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流式細胞術檢測細胞殺傷活性的應用與流程

細胞殺傷活性檢測是評估免疫細胞（如NK細胞、細胞毒性T淋巴細胞）或藥物抗腫瘤效果的重要實驗手段。流式細胞術因其高靈敏度、多參數分析能力，成為檢測細胞殺傷活性的主流方法之一。以下將詳細介紹實驗的樣品、項目、方法及儀器。

檢測樣品 本實驗主要檢測兩類樣品：

1. 靶細胞：通常為腫瘤細胞系（如K562、HeLa），用于模擬體內被攻擊的病變細胞。
2. 效應細胞：包括外周血單核細胞（PBMC）分離的NK細胞、CAR-T細胞或其他具有細胞毒性的免疫細胞。

實驗前需對靶細胞進行熒光標記（如CFSE或CellTrace™染料），效應細胞則保持未標記狀態，以便后續區分。

檢測項目 檢測的核心目標是量化效應細胞對靶細胞的殺傷效率，具體指標包括：

1. 靶細胞凋亡與壞死比例：通過膜聯蛋白V（Annexin V）和碘化丙啶（PI）雙染色區分早期凋亡、晚期凋亡及壞死細胞。
2. 細胞存活率：通過熒光標記靶細胞的減少比例計算殺傷率。
3. 特異性殺傷活性：排除自然死亡后，評估效應細胞的針對性殺傷能力。

檢測方法

1. 共培養體系構建

   • 將標記CFSE的靶細胞與效應細胞按不同比例（如10:1、5:1）混合，置于37℃、5% CO?培養箱中孵育4-24小時。
   • 設置僅含靶細胞的陰性對照組，用于校正自然死亡率。

2. 熒光標記與染色

   • 收集共培養后的細胞，加入Annexin V-FITC和PI染色液，避光孵育15分鐘。
   • 使用PBS洗滌后重懸于流式緩沖液中。

3. 流式細胞儀分析

   • 通過CFSE信號區分靶細胞與效應細胞，結合Annexin V和PI的熒光強度，分析靶細胞的凋亡與壞死情況。

檢測儀器

1. 流式細胞儀：

   • 推薦型號：BD FACSCanto™ II、Beckman CytoFLEX。
   • 配置要求：至少配備488 nm和640 nm激光器，可檢測FITC、PI等熒光信號。

2. 配套分析軟件：

   • BD FACSDiva™、FlowJo™或Kaluza，用于數據采集與統計學分析。

3. 輔助設備：

   • 細胞培養箱（37℃、5% CO?）、離心機（300×g）、微量移液器等。

總結 流式細胞術可通過多色熒光標記精準區分靶細胞與效應細胞，并定量分析殺傷活性，適用于藥物篩選、免疫治療評估及基礎免疫學研究。該方法操作標準化、結果重復性高，為細胞功能研究提供了可靠的技術支持。

實驗儀器

測試流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準。

2.文章中的圖片或者標準以及具體的試驗方案僅供參考，因為每個樣品和項目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準。

3.關于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（流式檢測細胞殺傷檢測）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。