流式檢測細胞焦亡檢測

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流式細胞術檢測細胞焦亡的技術方案與應用

細胞焦亡（Pyroptosis）是一種由炎性小體激活的細胞程序性死亡方式，與感染、免疫反應及多種疾病密切相關。近年來，流式細胞術因其高通量、高靈敏度的特點，成為檢測細胞焦亡的重要技術手段。本文將詳細介紹基于流式細胞術的細胞焦亡檢測方案，涵蓋檢測樣品、檢測項目、方法流程及儀器選擇。

一、檢測樣品

1. 細胞類型：適用于貼壁細胞（如THP-1、RAW264.7巨噬細胞）、懸浮細胞（如Jurkat細胞）或原代細胞（如外周血單核細胞）。
2. 樣品處理：需根據實驗設計對細胞進行刺激（如LPS聯合ATP處理、病原體感染或藥物干預），誘導焦亡發生。

二、檢測項目

1. 細胞膜完整性變化：焦亡伴隨細胞膜孔道形成，可通過膜聯蛋白V（Annexin V）與碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）雙染色區分早期與晚期焦亡細胞。
2. 炎性小體激活標志物：Caspase-1活化是焦亡關鍵通路，使用熒光標記的Caspase-1抑制劑（如FAM-YVAD-FMK）進行檢測。
3. 細胞內容物釋放：檢測胞內炎性因子（如IL-1β、IL-18）的釋放水平。

三、檢測方法

1. 細胞染色流程：

   • 收集細胞后，用預冷PBS洗滌兩次。
   • 加入Annexin V-FITC和PI避光孵育15分鐘（室溫）。
   • 對于Caspase-1檢測，加入FAM-YVAD-FMK探針孵育30分鐘（37℃）。
   • 流式緩沖液重懸細胞后上機檢測。

2. 數據分析：

   • Annexin V+/PI-：早期焦亡細胞。
   • Annexin V+/PI+：晚期焦亡或壞死細胞。
   • Caspase-1陽性細胞比例反映炎性小體激活程度。

四、檢測儀器

1. 流式細胞儀型號：

   • BD FACSCanto II：支持多色熒光檢測，適用于Annexin V/PI雙參數分析。
   • Beckman CytoFLEX：高靈敏度配置，適合檢測低豐度Caspase-1信號。
   • Attune NxT：適用于高通量樣本，可快速完成大批量數據分析。

2. 參數設置：

   • 激發波長：FITC（488 nm）、PI（561 nm）。
   • 數據采集軟件：FlowJo或BD FACSDiva進行圖形化分析。

五、應用場景

1. 藥物開發：評估化合物對炎性通路的影響。
2. 疾病機制研究：解析感染性疾病或自身免疫疾病中焦亡的作用。
3. 毒理學研究：檢測環境毒素或納米材料誘導的細胞損傷。

結語

流式細胞術為細胞焦亡研究提供了高效、精準的技術平臺。通過合理設計實驗方案、選擇特異性探針及優化儀器參數，可全面解析焦亡的動態過程及分子機制，為疾病治療和藥物研發提供重要依據。

實驗儀器

測試流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準。

2.文章中的圖片或者標準以及具體的試驗方案僅供參考，因為每個樣品和項目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準。

3.關于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（流式檢測細胞焦亡檢測）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。