小鼠treg細胞流式檢測

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小鼠調節性T細胞（Treg）流式檢測方案解析

導語 調節性T細胞（Treg）在免疫穩態和耐受中發揮關鍵作用，其功能異常與多種疾病相關。流式細胞術是檢測Treg細胞表型和比例的核心技術。本文針對小鼠Treg細胞的流式檢測方案進行詳細解析，涵蓋樣品類型、檢測指標、實驗方法及儀器信息。

一、檢測樣品

實驗樣品通常來源于C57BL/6或BALB/c品系小鼠的免疫組織，包括：

1. 脾臟：通過機械研磨聯合紅細胞裂解液制備單細胞懸液。
2. 淋巴結：取腘窩或腸系膜淋巴結，經研磨過濾后獲得細胞。
3. 胸腺：幼鼠胸腺組織經勻漿后分離胸腺細胞。
4. 外周血：肝素抗凝血經密度梯度離心分離外周血單個核細胞（PBMC）。

樣品制備需確保細胞活性（活細胞率>90%）和單細胞分散性，避免結塊影響檢測結果。

二、檢測項目

Treg細胞的典型表型為CD4+CD25+Foxp3+，常用檢測指標包括：

• 表面標志物：CD4（標記輔助T細胞）、CD25（IL-2受體α鏈）。
• 胞內標志物：Foxp3（Treg特異性轉錄因子）。
• 輔助標記：CTLA-4、GITR等活化相關分子（可選）。

檢測需設置同型對照和熒光補償對照，以排除非特異性信號干擾。

三、檢測方法

1. 樣本預處理

• 組織樣本經研磨后過70 μm細胞篩，紅細胞裂解液處理5分鐘去除紅細胞。
• 外周血或骨髓樣本采用Ficoll密度梯度離心法分離單核細胞。

2. 抗體染色

• 表面染色：CD4-FITC、CD25-APC抗體避光孵育30分鐘（4℃）。
• 固定與破膜：使用Foxp3專用固定/破膜劑處理細胞，加入Foxp3-PE抗體孵育45分鐘。

3. 流式檢測

• 上機前用40 μm濾網過濾細胞，調整細胞濃度為1×10^6/mL。
• 采集至少10,000個CD4+細胞，通過雙參數散點圖分析CD25和Foxp3共表達比例。

四、檢測儀器

實驗需配備以下設備：

• 流式細胞儀：BD FACSCanto II或Beckman CytoFLEX，配置488 nm和633 nm激光器，支持FITC、PE、APC多色檢測。
• 離心機：提供100–500×g離心條件（Eppendorf 5430R）。
• 細胞計數儀：如CountStar或臺盼藍手動計數。
• 恒溫孵育箱：維持37℃培養環境（可選用于活化實驗）。

儀器使用前需校準熒光通道，確保CV值（變異系數）<5%。

結語 流式細胞術為Treg細胞的精準鑒定提供了高效手段。通過標準化操作和嚴格的對照設置，可準確獲取Treg比例及其功能狀態數據，為免疫機制研究和藥物開發提供技術支持。

實驗儀器

測試流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準。

2.文章中的圖片或者標準以及具體的試驗方案僅供參考，因為每個樣品和項目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準。

3.關于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（小鼠treg細胞流式檢測）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。