熒光原位分子雜交檢測

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熒光原位雜交（FISH）檢測技術：原理、方法與應用

熒光原位雜交（Fluorescence In Situ Hybridization, FISH）是一種高靈敏度的分子生物學技術，廣泛應用于基因定位、染色體分析及病原微生物檢測等領域。本文將從檢測樣品、檢測項目、檢測方法及儀器設備等方面詳細介紹該技術的核心內容。

一、檢測樣品

FISH技術適用于多種生物樣本，包括：

• 組織切片：如腫瘤組織、冰凍切片或石蠟包埋組織。
• 細胞樣本：如外周血淋巴細胞、培養細胞或脫落細胞（如宮頸細胞）。
• 微生物樣本：如細菌、真菌或病毒感染的臨床樣本。
• 植物與動物樣本：用于基因組學研究和遺傳變異分析。

二、檢測項目

FISH技術可針對以下目標進行檢測：

1. 基因擴增與缺失：如HER2基因在乳腺癌中的擴增檢測。
2. 染色體易位與重排：如慢性粒細胞白血病中BCR-ABL融合基因的鑒定。
3. 微生物鑒定：如結核分枝桿菌、HPV病毒的分型檢測。
4. 端粒與著絲粒分析：用于染色體穩定性和遺傳疾病研究。
5. 單細胞基因表達：在空間分辨率下研究特定RNA的分布。

三、檢測方法

FISH技術的主要流程包括以下步驟： 1. 樣本制備 對樣本進行固定、透化處理，以保持細胞結構并增加探針滲透性。例如，組織切片需經脫蠟、蛋白酶消化等預處理。

2. 探針設計與標記 根據目標序列設計特異性DNA或RNA探針，并通過熒光染料（如FITC、Cy3、Texas Red）標記。探針類型包括位點特異性探針、全染色體涂染探針等。

3. 雜交反應 將標記探針與樣本DNA/RNA在高溫變性后孵育，使探針與互補序列結合。雜交條件需嚴格控制溫度、時間及緩沖液離子濃度。

4. 洗滌與封片 去除未結合的探針，通過梯度洗滌減少非特異性信號，最后用含DAPI的封片劑固定樣本。

5. 信號檢測 通過熒光顯微鏡觀察樣本，不同熒光標記的探針顯示為不同顏色信號，定位目標序列的精確位置。

四、檢測儀器

FISH技術依賴以下核心設備：

1. 熒光顯微鏡：配備多波段濾光片，用于激發和捕捉特定波長熒光信號。
2. 共聚焦顯微鏡：提高圖像分辨率，適用于三維樣本分析。
3. 圖像分析系統：如MetaSystems或Leica配套軟件，用于信號定量與空間定位分析。
4. 雜交儀：提供恒溫環境，確保雜交反應穩定性。
5. PCR儀與離心機：用于探針制備與樣本前處理。

五、技術優勢與展望

FISH技術結合了分子探針的高特異性和熒光成像的直觀性，在臨床診斷與基礎研究中具有不可替代的作用。隨著多重熒光標記技術和超分辨率顯微技術的發展，FISH將進一步提升檢測通量與精度，為精準醫學和基因組學研究提供更強支持。

本文為技術科普內容，具體實驗操作需結合專業指南與實驗室規范進行。

實驗儀器

測試流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準。

2.文章中的圖片或者標準以及具體的試驗方案僅供參考，因為每個樣品和項目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準。

3.關于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（熒光原位分子雜交檢測）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。