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注意：因業務調整，暫不接受個人委托測試望見諒。

金屬蛋白酶活性檢測實驗方法與流程

檢測樣品

本次實驗的檢測樣品包括以下三類：

1. 生物組織提取物：從小鼠肝臟、腎臟及腫瘤組織中提取的粗酶液；
2. 細胞培養上清液：人源肝癌細胞（HepG2）和正常肝細胞（LO2）的培養液；
3. 工業酶制劑：商品化金屬蛋白酶（如膠原酶、基質金屬蛋白酶MMP-9）。

所有樣品在檢測前均經過低溫離心（4℃，12000 rpm，15分鐘）和蛋白質濃度標定（Bradford法），確保樣品中無顆粒雜質干擾。

檢測項目

實驗主要針對以下指標進行分析：

• 酶活性測定：單位時間內底物降解速率；
• 動力學參數：包括米氏常數（Km）和最大反應速率（Vmax）；
• 抑制劑篩選：EDTA、1,10-菲羅啉等金屬離子螯合劑對活性的抑制效果。

檢測方法

分光光度法（以熒光底物為例）

1. 反應體系配置：將50 μL酶樣品與200 μL緩沖液（50 mM Tris-HCl，pH 7.4，含5 mM CaCl?）混合；
2. 底物加入：加入熒光標記的明膠底物（FITC-Gelatin，終濃度10 μg/mL）；
3. 反應啟動：37℃恒溫孵育30分鐘，立即加入50 μL 10%三氯乙酸終止反應；
4. 信號檢測：離心后取上清液，使用熒光分光光度計測定激發波長495 nm、發射波長515 nm下的熒光強度；
5. 數據處理：通過標準曲線計算底物降解量，活性單位定義為每分鐘降解1 μg底物所需的酶量（U/mg）。

檢測儀器

實驗使用的主要儀器及參數如下：

• 熒光分光光度計：型號Cary Eclipse（安捷倫科技），配備溫控模塊，檢測靈敏度0.1 nM FITC；
• 低溫高速離心機：Eppendorf 5425R，最大轉速15000 rpm；
• 恒溫孵育箱：Memmert IF75，控溫精度±0.1℃；
• 酶標儀：BioTek Synergy H1，用于高通量抑制劑篩選實驗。

注意事項

1. 樣品處理需全程在冰上操作，避免酶活性損失；
2. 底物濃度需根據預實驗結果優化，避免過量導致信號飽和；
3. 抑制劑實驗中需設置空白對照（無酶）和陽性對照（已知活性酶）。

通過上述方法，可高效、精準地評估金屬蛋白酶在不同條件下的活性特征，為疾病機制研究或工業酶應用提供數據支持。

實驗儀器

測試流程

注意事項

1.具體的試驗周期以工程師告知的為準。

2.文章中的圖片或者標準以及具體的試驗方案僅供參考，因為每個樣品和項目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準。

3.關于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（金屬蛋白酶活性檢測）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。